Выделение чистых культур патогенных клостридий

Исследуемый материал:

Посев на плотные среды: чашечка с кровяным агаром, чашечка с бензидиновым агаром, чашечка со средой Виллиса-Хоббс, пробирки со средой Вильсон-Блера Инкубация в анаэробных критериях при 37° в течение 1-7 суток. Посев на водянистые среды для скопления (мясные, казеиновые). Инкубация при 37° в те­чение от 16 часов до 15 суток. Выросшие культуры Выделение чистых культур патогенных клостридий, содержащие массу грамположительных палочек, пересевают на плотные среды, как обозначено.

Микроскопия и пересев на мясную либо казеиновую среду колоний, вызывающих гемолиз, покраснение, опалесценцию либо почернение на одной из указан­ных сред и состоящих из грамположительных палочек, для получения незапятнанных культур и следующего исследования их параметров.

Среда Виллиса-Хоббс : смесь Выделение чистых культур патогенных клостридий (400 мл бульона Хоттингера + 4,8 грамма агара; 4,8 грамма лактозы и 1,3 мл 1% раствора нейтрального красноватого) автоклавируют, охлаждают до 55-50 и добавляют 15 мл суспензии яичного желтка и 60 мл стерильного обезжиренного молока.

2. Предпосылки высочайшей чувствительности серьезных анаэробов к кислороду разъясняют последующими обстоятельствами:

1. Отсутствием у их каталазы (в присутствии кислорода накап­-
ливается перекись водорода, которая и Выделение чистых культур патогенных клостридий оказывает антибактериальное
действие на анаэробы).

2. В аэробных критериях тормозятся анаэробные энерго
процессы (пастеровский эффект).

3. Отсутствием у анаэробов систем регуляции окислительно-
восстановительного потенциала. В присутствии кислорода он повы­-
шается, анаэробы не могут снизить его до нужного уровня, и
потому их рост угнетается.

З А Н Я Т И Е6

Дата ______________

Тема: Бактериологический способ (3 денек Выделение чистых культур патогенных клостридий). Идентификация незапятнанных культур микробов. Биохимическая активность микробов.

Итоговое контрольное занятие «Морфология и физиология бактерий».

План занятия:

1. Ферменты микробов. Регистрация результатов посева на среды пестрого ряда.

2. Регистрация результатов опыта с посевами микробов на среды Эндо, Плоскирева и МПА.

3. Итоговый контроль по теме «Морфология и физиология бактерий».

Методические указания

1.Зарегистрировать результаты посева Выделение чистых культур патогенных клостридий на среды «пестрого ряда» пищеварительной палочки и фекального щелочеобразователя. Ферментация углевода с образованием кислоты и газа обозначается знаками КГ; с образование только кислоты - буковкой К. Свертывание молока и образование индола обозначается +; отсутствие ферментации углевода, свертывания молока либо образования индола и сероводорода обоз­начается знаком -.

Результаты посева на среды Выделение чистых культур патогенных клостридий “пестрого ряда”.

Виды микробов Глюкоза Лактоза Маннит Сахароза Молоко Индол H2S Подвижность
Пищеварительная палочка
Фекальный щелочеобразователь

Заключение:_____________________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________

2. Отметить различия в нраве роста пищеварительной палочки и фекального щелочеобразователя (размер, прозрачность и расцветка колоний на средах Плоскирева и Эндо), также интенсивность роста их и стафилококка на средах Плоскирева, Эндо и МПА Выделение чистых культур патогенных клостридий. В случае роста микробов в виде отдельных колоний подсчитать количество колоний каждо­го вида микробов на всех средах. Результаты зарисовать и зарегистрировать в таблице .

Результаты посева на среды Плоскирева, Эндо, МПА

Мельчайший организм Количество колоний либо степень интенсивности роста на средах
Плоскирева Эндо МПА
Пищеварительная палочка
Фекальный щелочеобразователь
Стафилококк
МПА Среда Выделение чистых культур патогенных клостридий Эндо
1. Escherichia coli; 2. Alcaligenes faecalis; 3. Staphylococcus

Вопросы к итоговому контролю по теме «Морфология и физиология бактерий».

1. Строение бактериальной клеточки.

2. Спора микробов, строение, предназначение, отличия от спор грибов.

3. Главные составляющие белоксинтезирующей системы микробов.

4. Принцип фазовоконтрастной микроскопии.

5. Принцип темнопольной микроскопии.

6. Главные отличия меж прокариотами и эукариотами.

7. Главные типы Выделение чистых культур патогенных клостридий культур микробов.

8. Признаки, используемые для идентификации микробов.

9. Определения всех способов микробиологической диагностики.

10. Структура жгутика микробов.

11. Систематизация микробов по количеству и взаиморасположению жгутиков.

12. Способы определения подвижности микробов.

13. Структура пептидогликана.

14. Принцип расцветки микробов по Граму, отличия клеточной стены грамположительных и грамотрицательных микробов.

15. В каких случаях употребляются определения «бактерии», «бациллы», «клостридии»?

16. Что такое L Выделение чистых культур патогенных клостридий-формы микробов, в каких случаях они появляются?

17. Способы выявления спор у микробов.

18. Что такое нумерическая таксономия?

19. Что такое конститутивные, индуцибельные, репрессибельные ферменты?

20. Отличия меж ядерным аппаратом прокариот и эукариот.

21. Структура и функции цитоплазматической мембраны.

22. Функции клеточной стены микробов.

23. Что такое мини-клетки, когда они образуются?

24. Типы дыхания микробов, суть Выделение чистых культур патогенных клостридий и разница.

25. Строение и функции липополисахарида клеточной стены.

26. Что такое «вид» мельчайшего организма?

27. Что такое архебактерии?

28. Систематизация микробов по морфологии и взаиморасположению.

29. Механизм деления микробов. Время жизни клеточки (формула).

30. Механизмы поступления питательных веществ в бактериальную клеточку.

31. Активный транспорт веществ у микробов.

32. Систематизации питательных сред, требования к ним.

33. Что Выделение чистых культур патогенных клостридий такое плазмиды?

34. Что такое микроаэрофилы?

35. Предпосылки чувствительности анаэробов к молекулярному кислороду воздуха.

36. Состав среды Китта-Тароцци.

37. Состав и химизм работы среды Вильсон-Блера.

38. Что такое волютин, как его выявляют и у каких микробов?

39. Этапы выделения незапятанной культуры возбудителя.

40. Как изучают протеолитические характеристики микробов?

41. Как изучают сахаролитические характеристики микробов?

42. Способы культивирования Выделение чистых культур патогенных клостридий анаэробов.

43. Определение подвижности микробов по Пешкову.

44. Как у микробов определяют способность выделять индол?

45. Как у микробов определяют способность выделять сероводород?

46. Состав среды Эндо, как на ней вырастают различные пищеварительные бактерии?

47. Как изучают развернутые биохимические характеристики микробов?

48. Какой состав имеют МПА и МПБ?

49. Как судят о чистоте выделенной культуры мельчайшего организма Выделение чистых культур патогенных клостридий?

50. Актиномицеты, морфология, друза.

51. Плесневые (нитчатые) грибы, родовые морфологические отличия.

52. Микроскопичная дифференциальная диагностика малярии.

53. Именовать патогенных простых из класса Flagellata.

54. Морфология трипаносом, какие заболевания они вызывают?

55. Морфологические отличия дрожжей и дрожжеподобных грибов Candida.

56. Морфология токсоплазмы, ее роль в патологии человека.

57. Диагностика амебиаза, морфология и актуальный цикл возбудителя Выделение чистых культур патогенных клостридий.

58. Морфологические отличия возбудителя вивакс и тропической малярии.

59. Чем отличается лейшманиальная форма лейшмании от лептомонадной?

60. Патогенные спирохеты, морфология и систематизация.

61. Что такое стерилизация и дезинфекция?

62. Способы стерилизации.

63. Способы контроля свойства стерилизации.

З А Н Я Т И Е7

Дата ______________

Тема: Бактериофагия. Генетика микробов. Мутации и рекомбинации.

План занятия:

1. Явление бактериофагии. Демонстрация Выделение чистых культур патогенных клостридий парадокса бактериофагии на водянистых и плотных средах.

2. Способы титрования фага.

3. Типы и механизмы генетических рекомбинаций: трансформация, трансдукция, конъюгация (разбор схем).

а) Опыт трансдукции (разбор)

б) Постановка опыта конъюгации.

2.Плазмиды микробов. Классы и характеристики R-плазмиды.

3.Молекулярные механизмы мутаций у микробов (разбор).

4.Получение рекомбинантных молекул ДНК (разбор).

Методические указания

1. Зарисовать парадокс бактериофагии Выделение чистых культур патогенных клостридий на плотной питательной среде.

2. Для титрования бактериофага употребляются разные способы. Более четким является способ агаровых слоев, предложенный Грациа. Суть этого способа состоит в последующем.1,5%-ный МПА с генцианвиолетом (0,1 мл 0,1% генционвиолета на 1 л среды), который добавляется для предохранения от загрязнения грамположительной воздушной микрофлорой, намедни опыта разли­вают по 25-30 мл Выделение чистых культур патогенных клостридий в чашечки Петри. Чашечки отлично просушивают в термостате либо под антибактериальной лампой, после этого оставляют на ночь при комнатной температуре.

Перед опытом 0,7% МПА расплавляют и разливают по 2,5 мл в пробирки, охлаждают до 46-47°С и потом добавляют в пробирки по 1 мл исследуемого фага (за ранее разведенного) и 0,1 мл эталонной культуры Выделение чистых культур патогенных клостридий, все это стремительно и кропотливо перемешивают, вращая пробирку меж ладонями, после этого выливают в чашечки на поверх­ность 1,5% агара. Смесь аккуратными движениями распределяют так, чтоб над слоем 1,5% агара образовался слои 0,7% агара, содержащего бактериофаг и чувствительную к нему культуру микробов. Для застывания добавленного агара чашечки оставляют на столе на 1-1,5 часа, а Выделение чистых культур патогенных клостридий потом помещают в термостат при 37°С . Для получения точных результатов нужно соблюдение последующих критерий: а) чашечки с 1,5% агаром должны быть отлично высушены; б) чашечки должны находиться после прибавления 0,7% агара строго в горизонтальном положении во избежание стекания агара в одну сторону; в) расплавленный 0,7% агар после остывания до 46°С нельзя длительно хранить Выделение чистых культур патогенных клостридий, потому что он может приобрести гелеобразную консистенцию.

Учет результатов титрования можно создавать после 5-6-часо­вого инкубирования в термостате. Для этого подсчитывают количество колоний фага («стерильных» пятен) и множат приобретенное число на фактор разведения. На­пример, при посеве 1 мл фага, разведенного в 10-7 на чашечке найдено 45 колоний, как следует, титр фага Выделение чистых культур патогенных клостридий равен 45×107 = 4,5×108 Зарисовать демо опыт титрования фага по Грациа.

Бактериофагия на плотной ПС («стерильные» пятна) Титрование фага по способу агаровых слоёв (по Грациа)

3. а) Опыт трансдукции.

К 1 мл 3-часовой бульонной культуры реципиента Е. соli 1ас- добавляют в таком же количестве трансдуцирующий фаг, выделенный из культуры Е. соli Выделение чистых культур патогенных клостридий 1ас+, в концентрации 106-107 . Смесь инкубируют при 37°С в течение часа, после этого 0,1 мл высевают на среду Эндо. В качестве контроля на среду Эндо высевают также культуру Е.соli lас+ (реципиент без фага). Посевы ставят на день в термостат. Учет результатов создают по числу выросших окрашенных колоний.

б) Опыт конъюгации.

Суть Выделение чистых культур патогенных клостридий опыта состоит в том, что от донорных клеток методом конъюгации передаются гены, контролирующие способность синтезировать треонин и лейцин, клеткам-реципиентам, ауксотрофным по этим аминокислотам.

В качестве донора употребляется культура Е. coli Hfr с генотипом tre+, lei+, met-, strs (strs – чувствительность к стрептомицину). Реципиентом служит культура Е. coli F– с генотипом Выделение чистых культур патогенных клостридий tre-, lei-, met+, strr (strr - устойчивость к стрептомицину) .

Для выделения рекомбинантов употребляют солевую среду М-9 со стрептомицином, содержащую глюкозы 1,0 г; стрептомицина – 200 ед/мл; NH4Cl – 1,0 г; NaС1 – 0,5 г; Na2HРO4 – 6,0 г; КH2PO4 – 3,0 г; Mg2SO4 – 0,2 г; дистиллированной воды – 1,0 л. Для тех же целей может быть испо­льзована уплотненная среда Выделение чистых культур патогенных клостридий. В данном случае к обозначенному составу добавля­ется 20,0 г агар-агара.

На этой среде могут расти только рекомбинанты (трансконъюганты). Культуры донорного и реципиентного штаммов не вырастают на данной среде, потому что 1-ая ауксотрофна по метионину и чувствительна к стрептомицину, а 2-ая ауксотрофна по треонину и лейцину.

Постановка опыта Выделение чистых культур патогенных клостридий: к 2 мл 3-часовой бульонной культуры реципиен­та добавляют 1 мл 3-часовой бульонной культуры донора. Смесь инкубируют в течение 30 минут при 37°С. Потом смесь разводят в 100 и 1000 раз и засевают разведения в объеме 0,1 мл на селективную среду для выделения рекомбинантов. В качестве контроля на такую же среду засевают культуры донора и реципиента Выделение чистых культур патогенных клостридий в том же объеме. На последующие день регистрируют результаты опыта. В пробирках с посевом рекомбинанта наблюдается помутнение среды. В средах с посевами донорной и реципиентной культур роста нет. Аналогичным образом регистрируют результаты посевов на плотных средах.

Просмотреть посевы культур донора, реципиента и рекомбинантов на малой среде Выделение чистых культур патогенных клостридий со стрептомицином. Направить внимание на рост культуры рекомбинантов. Культуры донора и реципиента не вырастают на данной среде, потому что культура донора ауксотрофна по метионину и чувствительна к стрептомицину, а культура реципиента ауксотрофна по треонину и лейцину.

Контрольные вопросы

Что такое бактериофаг?

Каковы морфология, размеры и хим состав фагов?

Что содержится в головке бактериофага Выделение чистых культур патогенных клостридий?

Как устроен хвостик фага и каково его предназначение?

Из каких шагов складывается взаимодействие фага с микробной клеточкой?

Каким образом фаг вводит свою нуклеиновую кислоту в микробную клеточку?

Как осуществляется синтез фаговых частиц снутри микробной клеточки?

Какая разница меж вирулентным и умеренным фагом?

Что такое лизогения и Выделение чистых культур патогенных клостридий лизогенная конверсия?

Как выделяют фаги из объектов наружной среды?

Какова методика определения титра фага по Грациа?

Что такое фаготипирование? С какой целью оно применяется?

Что такое ген?

Что такой мутации спонтанные и индуцированные?

Каковой молекулярный механизм мутации?

Какие вы понимаете мутагены?

Что такое ауксотрофы? Как получают ауксотрофные штаммы микробов Выделение чистых культур патогенных клостридий?

Каковой механизм генетических рекомбинаций?

Что такое трансформация?

Что такое трансдукция и какими качествами обладает трансдуцирующий фаг?

Что такое конъюгация микробов? Как она осуществляется?

Как создают картирование хромосом?

Что такое плазмида?

Какие известны классы плазмид?

Каковы главные характеристики плазмид?

Какие есть типы генетического контроля фармацевтической стойкости у микробов?

Каковы главные Выделение чистых культур патогенных клостридий функций F-фактора?

В чем заключается механизм конъюгации микробов?

Что такое бактериоцины?

Каковы главные характеристики Соl -плазмид?

Какими качествами владеют R-плазмиды?

Как определяют конъюгативные характеристики плазмид?

Как получают рекомбинантные молекулы ДНК?

Что такое генетический вектор?

Как у микробов можно найти плазмиды?

В каких направлениях могут быть применены заслуги Выделение чистых культур патогенных клостридий генной инженерии?

Приложение к ЗАНЯТИЮ 7.

Определение понятия ген

Ген – универсальная организующая структурная единица живой материи, которая благодаря содержащейся в ней закодированной информа­ции обеспечивает единство и обилие всех форм существования жизни, ее непрерывность и эволюцию.

Ген– основной носитель и хранитель жизни, а его продукт – бе­лок – метод её существования.


video-prezentaciya-kompanii-httpsyoutubet3ebgfhuxhw.html
video-v-efire-teleperedacha-bolshaya-raznica.html
videogramma-dokumenta-izobrazhenie-dokumenta-na-ekrane-elektronno-luchevoj-trubki.html